1 M Tris-HCl (pH7.4，7.6，8.0)
组份浓度   1 M Tris-HCl
配制量      1L
配制方法   1.称量121.1 g Tris置于l L烧杯中。
                  2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3.按下表加入浓HCl量调节所需要的pH值。
pH值      浓HCl
7.4      约70 ml
7.6      约60 ml
8.0      约42ml
4.将溶液定容至1 L。
5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1.5 M Tris-HCl (pH8.8)              
   组份浓度   1.5 MTris-HCl
配制量      1 L
配制方法   1.称量181.7 g Tris置于1 L烧杯中。
                  2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3.用浓HCl调节pH值至8.8。
                  4.将溶液定容至1 L。
                  5.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：应使溶液冷却至室温后再调定pH值，因为Tris溶液的pH值随温度的变化差异很大，温度每升高l℃，溶液的pH值大约降低0.03个单位。

1 0×TE Buffer (pH7.4, 7.6，8.0)           
组份浓度   100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA
配制量      1 L
配制方法   1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl Buffer(pH7.4，7.6，8.0)      100 ml
500 mM EDTA(pH8.0)      20 ml
                  2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，均匀混合。
                  3.将溶液定容至1 L后，高温高压灭菌。
                  4.室温保存。

3 M醋酸钠(pH5.2)                 
组份浓度   3 M醋酸钠
配制量      100 ml
配制方法   1.称量40.8 g NaOAc•3H2O置于100~200 ml烧杯中，加入约40 ml的去离子水搅拌溶解。
                  2.加入冰醋酸调节pH值至5.2。
                  3.加去离子水将溶液定容至100 ml。
                  4.高温高压灭菌后，室温保存。

PBS Buffer                 
组份浓度   137 mM NaCl，2.7 mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 mM KH2PO4
配制量      1 L
配制方法   1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
NaCl        8 g
KCl        0.2 g
Na2HPO4      1.42 g
KH2PO4      0.27 g
                  2.向烧杯中加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3.滴加浓HCl将pH值调节至7.4，然后加入去离子水将溶液定容至1 L。
                  4.高温高压灭菌后，室温保存。
注意：上述PBS Buffer中无二价阳离子，如需要，可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

10 M醋酸铵     
组份浓度   10 M醋酸铵
配制量      100 ml
配制方法   1.称量77.1 g醋酸铵置于100~200 ml烧杯中，加入约30 ml的去离子水搅拌溶解。
                  2.加去离子水将溶液定容至100 ml。
                  3.使用0.22 µm滤膜过滤除菌。
4.密封瓶，室温保存。
注意：醋酸铵受热易分解，所以不能高温高压灭菌。

Tris-HCl平衡苯酚     
配制方法   1.使用原料：大多数市售液化苯酚是清亮无色的，无需重蒸馏便可用于分子生物学实验。但有些液化苯酚呈粉红色或黄色，应避免使用。同时也应避免使用结晶苯酚，结晶苯酚必须，160℃对其进行重蒸馏除去诸如醌等氧化产物，这些氧化产物可引起磷酸二酯键的断裂或导致RNA和DNA的交联等。因此，苯酚的质量对DNA、RNA的提取极为重要，我们推荐使用高质量的苯酚进行分子生物学实验。
               2.操作注意：苯酚腐蚀性极强，并可引起严重灼伤，操作时应戴手套及防护镜等。所有操作均应在通风橱中进行，与苯酚接触过的皮肤部位应用大量水清洗，并用肥皂和水洗涤，忌用乙醇。
                  3.苯酚平衡：因为在酸性pH条件下DNA分配于有机相，因此使用苯酚前必须对苯酚进行平衡使其pH值达到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下：
                  ①液化苯酚应贮存于-20℃，此时的苯酚呈结晶状态。从冰柜中取出的苯酚首先在室温下放置使其达到室温，然后在68℃水浴中使苯酚充分融解。
                  ②加入羟基喹啉(8-Qulnollnol)至终浓度0.1%。该化合物是一种还原剂、RNA酶的不完全抑制剂及金属离子的弱螯合剂，同时因其呈黄色，有助于方便识别有机相。
      ③加入等体积的1 M Tris-HCl(pH8.0)，使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
                  ④重复操作步骤③。
                  ⑤加入等体积的0.1 M Tris-HCl(pH8.0)。使用磁力搅拌器搅拌l5min，静置使其充分分层后，除去上层水相。
                  ⑥重复操作步骤⑤，稍微残留部分上层水相。
                  ⑦使用pH试纸确认有机相的pH值大于7.8。
                  ⑧将苯酚置于棕色玻璃瓶中4℃避光保存。

苯酚/氯仿/异戊醇  
配制方法   l.说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚，氯仿/异戊醇(25:24:1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。  
                  2.配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇(24:1)混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

10%(W/V)SDS     
组份浓度   10%(W/V)SDS
配制量      100 ml
配制方法   1.称量10 g高纯度的SDS置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水，68℃加热溶解。
                  2.滴加浓HCl调节pH值至7.2。
                  3.将溶液定容至100 ml后，室温保存。

2 N NaOH     
组份浓度   2 N NaOH
配制量      100 ml
配制方法   1.量取80 ml去离子水置于100~200 ml塑料烧杯中(NaOH溶解过程中大量放热，有可能使玻璃烧杯炸裂)。
                  2.称取8 g NaOH小心地逐渐加入到烧杯中，边加边搅拌。
                  3.待NaOH完全溶解后，用去离子水将溶液定容至100 ml。
                  4.将溶液转移至塑料容器中后，室温保存。

2.5 N HCl     
组份浓度   2.5 N HCl
配制量      100 ml
配制方法   1.在78.4 ml的去离子水中加入21.6 ml的浓HCl(11.6 N)，均匀混合。
                  2.室温保存。

5 M NaCl     
组份浓度   5 M NaCl
配制量      1 L
配制方法   1.称量292.2 g NaCl置于1 L烧杯中，加入约800 ml的去离子水后搅拌溶解。
                  2加去离子水将溶液定容至1 L后，适量分成小份。     
                  3.高温高压灭菌后，4℃保存。

20%(W/V)Glucose(葡萄糖)
组份浓度   20%(W/V)Glucose
配制量      100 ml
配制方法   1.称取20 g Glucose置于100~200 ml烧杯中，加入约80 ml的去离子水后。搅拌溶解。
                  2.加去离子水将溶液定容至l 00 ml。
                  3.高温高压灭菌后，4℃保存。

Solution l (质粒提取用)
   组份浓度   25 mM Tris-HCl(pH8.0)，10 mM EDTA，50 mM Glucose
配制量      1 L
配制方法   1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
1 M Tris-HCl(pH8.0)      25 m
0.5 M EDTA(pH8.0)      20 m
20% Glucose(1.11 M)      45 m
dH2O      910 m
                  2.高温高压灭菌后，4℃保存。
                  3.使用前每50 ml的Solution l中加入2 ml的RNase A(20 mg/ml)。

Solution Ⅱ(质粒提取用)
组份浓度   200 mM NaOH，1%(W/V)SDS
配制量      500 ml
配制方法   1.量取下列溶液，置于500 ml烧杯中。
10%SDS      50 ml
2NNa0H      50 ml
                  2.加灭菌水定容至500 ml，充分混匀。
                  3.室温保存。此溶液保存时间最好不要超过一个月。
注意：SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。

Sol ution Ⅲ(质粒提取用)
组份浓度   3 M KOAc，5 M Ethanoic acid (乙酸)
配制量      500 ml
配制方法   1.称量下列试剂，置于500 ml烧杯中。
KOAc      147g
Ethanoic acid      57.5ml
                  2.加入300 ml去离子水后搅拌溶解。
                  3.加去离子水将溶液定容至500 ml。
                  4.高温高压灭菌后，4℃保存。

0.5 M EDTA (pH8.0)  
组份浓度   0.5 M EDTA
配制量      1 L
配制方法   1.称取186.1 g Na2EDTA•2H2O，置于1 L烧杯中。
                  2.加入约800 ml的去离子水，充分搅拌。
                  3.用NaOH调节pH值至8.0(约20gNaOH)。
                  注意：pH值至8.0时，EDTA才能完全溶解。
                  4加去离子水将溶液定容至1 L。
                  5.适量分成小份后，高温高压灭菌。
                  6.室温保存。

1 M DTT     
组份浓度   1 M DTT
配制量      20 ml
配制方法   1.称取3.09 g DTT，加入到50 ml料离心管内。
                  2.加20 ml的0.01 M NaOAc(pH5.2)，溶解后使用0 22 µm滤膜过滤除菌。
                  3.适量分成小份后，-20℃保存。

10 mM ATP     
组份浓度   10 mM ATP
配制量      20 mL
配制方法   1.称取121 mg Na2ATP•3H2O，加入到50 ml塑料离心管内。
                  2. 加20 ml的25 mM Tris-HCl(pH8.0)，搅拌溶解。
                  3.适量分成小份后，-20℃保存。

二、蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法

30%(W/V)Acrylamide(丙烯酰胺)
组份浓度   30%(W/V)Acrylamide
配制量      1 L
配制方法   1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
Acrylamide      290 g
BIS(双丙烯酰胺)      10 g
                  2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。
                  4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

40%(W/V)Acrylamide  
组份浓度   40%(W/V)Acrylamide
配制量      1 L
配制方法   1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
Acrylamide      380 g
BIS      20 g
                  2.向烧杯中加入约600 ml的去离子水，充分搅拌溶解。
                  3.加去离子水将溶液定容至l L，用0.45 µm滤膜滤去杂质。
                  4.于棕色瓶中4℃保存。
注意：丙烯酰胺具有很强的神经毒性，并可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套等。聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成份。

10%(W/V) AP (过硫酸铵)
组份浓度   10%(W/V)AP
配制量      10 ml
配制方法   1.称取1 g AP。
                  2.加入10 ml的去离子水后搅拌溶解。
                  3.贮存于4℃。
注意：1 0%过硫酸铵溶液在4℃保存时可使用2周左右，超过期限会失去催化作用。

5×Tris-Glyclne Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液)
组份浓度   0.125 M Tris，1.25 M Glyclne(甘氨酸)，0.5%(W/V)SDS
配制量      1 L
配制方法   1.称量下列试剂，置于l L烧杯中。
Tris      15.1 g
Glyclne      94 g
SDS      5.0 g
                  2.加入约800 ml的去离子水，搅拌溶解。
                  3.加去离子水将溶液定容至1 L后，室温保存。

2×SDS -PAGE Loading Buffer
组份浓度
100 mM      Tris-HCl(pH6.8)
100 mM      β-巯基乙醇(2-ME)
4%(W/V)      SDS
0.2%(W/V)      溴酚兰(BPB)
20%(V/V)      甘油
配制量      5 ml
配制方法   1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。
0.25 M Tris-HCl(pH6.8)      0.25 ml
β-巯基乙醇      0.5 ml
SDS      0.2 g
甘油      1 ml
1%溴酚兰      0.1 ml，
2.加去离子水溶解后定容至5 ml。
                  3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。
                  4.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右

5×SDS-PAGE Loading Buffer
250 mM      Tris-HCl(pH6.8)
10%(W/V)      SDS
0.5%(W/V)      BPB
50%(V/V)      甘油
5%(W/V)      2-ME
组份浓度





配制量      5 ml
配制方法   1.量取下列试剂，置于10 ml塑料离心管中。
1 M Tris-HCl(pH6.8)      1.25 ml
SDS      0.5 g
BPB      25 mg
甘油      2.5 ml


                    
                 

2.加去离子水溶解后定容至5 ml。
                  3.小份(500 µl/份)分装后，于室温保存。
                  4.使用前将25 µl的2-ME加到每小份中。
                  5.加入2-ME的Loading Buffer可在室温下保存一个月左右。

考马斯亮蓝R-250染色液
组份浓度   0.1%(W/V)考马斯亮蓝R-250，25%(V/V)异丙醇，10%(V/V)冰醋酸
配制量      1 L
配制方法   1.称取1 g考马斯亮蓝R-250，置于1 L烧杯中。
                  2.量取250 ml的异丙醇加入上述烧杯中，搅拌溶解。
                  3.加入100 ml的冰醋酸，搅拌均匀。
                  4.加入650 ml的去离子水，搅拌均匀。
                  5.用滤纸除去颗粒物质后，室温保存。

考马斯亮蓝染色脱色液     
组份浓度   10%(V/V) Ethanoic acid，30%(V/V)乙醇
配制量      1 L
配制方法   1.量取下列溶液，置于l L烧杯中。
Ethanoic acid      100 ml
乙醇      300 ml
dH2O      600 ml
                     2.充分混合后使用。

凝胶固定液(SDS-PAGE银氨染色用)
组份浓度   50%(V/V)甲醇，10%(V/V) Ethanoic acid
配制量      100 ml
配制方法   1.量取下列试剂，加入100~200 ml的试剂瓶中。
甲醇      500 ml
Ethanoic acid      100 ml
dH2O      400 ml
                  2.均匀混合后室温保存。